Page 10 - No28
P. 10

KLÍMAVÁLTOZÁS, HŐHULLÁMOKTOK
                                MŰSZERES
                                                                 VIZSGÁLA
                                                    KÉMIAI


                                            FORDÍTOTT FÁZISÚ                   molekulákat, mint peptideket és
                                            FOLYADÉK                           fehérjéket is el tudunk választani az ionos
                                            KROMATOGRÁFIA                      kölcsönhatásuk alapján. Ezt a fajta
                                              Nagy forradalmat jelentett, amikor   kromatográfiát preparativ célra is
                                            megfordították az állófázis és mozgó fázis   alkalmazzák, az oszlopok méretének
                                            polaritását. Bevonták a poláris szilikagél   növelésével, mivel az elválasztott fehérje
                                            felszínét hosszú alkil láncokkal, amely   molekulák megőrzik természetes aktív
                                            lehetővé tette, hogy a mozgófázis poláris,   tulajdonságaikat az elválasztás után.
                                            magas víztartalmú folyadék legyen. Így a
                                            fordított fázisú nagynyomású       MÉRETKIZÁRÁSOS
                                            kromatográfia létrejöttével, poláris,   KROMATOGRÁFIA
                                            vízoldékony anyagokat, aminosavakat,   A biokémiai kutatásokban nagy
                                            peptideket, oligonukleotidokat, cukrokat   szerepet játszik a méretkizárásos (size-
                                            is el lehetett választani. Ez az eljárás nagy   exclusion) kromatográfia amely
                                            segítséget nyújtott a biokémia tudomány   hidrodinamikai átmérőjük vagy
                                            robbanásszerű fejlődéséhez is. A fordított   hidrodinamikai térfogatuk alapján
                                            fázisú kromatográfiás eljárás további   választja el a molekulákat (a nagyobb
                                            előnye, hogy a retenciós idő az anyagok   molekulák gyorsabban eluálódnak). Az
                                            hidrofil-lipofil jellegétől függenek, ami a   állófázis ezesetben porózus gél. Itt az
                                            képletből könnyen számítható.      elució sorrendjét kizárólag a molekula
                                            Amennyiben vízzel keveredő szerves   mérete határozza meg, az anyagok nem
                                            oldószert is alkalmazunk, amelynek   lépnek erős kölcsönhatásba az állófázissal,
                                            koncentrációját az analízis alatt   amely mintegy szűrő viselkedik. A kisebb
                                            folyamatosan növeljük, komplex elegyek   molekulák nagyobb utat tesznek meg a
                                            szétválaszthatók, és koncentrációjuk   kromatográfiás rendszerben, mert
                                            mérhetővé válik egy analízis során. Ezt   beférnek az allófázis kis pórusaiba, míg a
                                            nevezzük gradiens elúciós          nagyobb molekulák gyorsabban
                                            kromatográfiának. Ennek segítségével   áthaladnak a gél állófázis csatornáin. Ez a
                                            narancs kivonatot, gyógyszerkeverékeket,   fajta kromatográfia kiválóan alkalmas
                                            vizelet és vérplazma mintákat lehet   nagymérető biokémiai molekulák
                                            analizálni, kis mintaelőkészítés után pár   elválasztására, pl. ellenanyagok,
                                            perc alatt. Nagy előnye a kromatográfiás   antitestek, vagy akár kisebb vírusok
                                            analízisnek, hogy nagyon kevés mintára   analízisére is.
                                            van szükség 10 mikroliter 1 mM os    Az affinitás kromatográfia a biokémiai
                                            koncentrációban, ultraibolya detektorral   elegyek specifikus biológiai
                                            aromás gyűrűt tartalmazó molekulákat   kölcsönhatásán alapuló elválasztás. Ilyen
                                            tudunk mérni. Amennyiben           biológiai kölcsönhatás például az antigén
                                            tömegspektrométert is helyezünk az UV   és antitest vagy enzim és szubsztrát,
                                            detektor után, az egyes csúcsokat mutató   illetve receptor és ligandum közötti
                                            molekulák mólsúlya is meghatározható,   kapcsolat.
                                            így a molekulák könnyen              A kromatográfiás elválasztás
                                            beazonosíthatóvá válnak. A         hatékonyságára a legjobb példa a királis
                                            tömegspektroszkópiás detektorok még   kromatográfia, amely az állófázissal eltérő
                                            érzékenyebbek, mint az UV detektorok,   módon reagáló sztereoizomerek
          előre megjósolni az elúció sorrendjét.   így például egy billiomodnyi (ppb)   elválasztására is alkalmas. Az
          További hátrány, hogy a minta poláris   szennyező anyagot is ki tudunk mutatni   enantiomerek csak optikailag aktív
          komponensei irreverzibilisen kötődhetnek   gyógyszeralapanyagokban.  rendszerben mutatnak különbséget,
          az álló fázishoz. A nagy tisztaságú szerves   Amennyiben az állófázis ioncserélő,   minden más fizikai és kémiai
          oldószerek drágák és mérgezőek a   (pld. pozitív vagy negatív töltésű) gyanta,   tulajdonságuk megegyezik és mégis el
          környezet számára is. Ezért ezt a fajta   ioncserélő kromatográfiás mechanizmus   tudjuk választani őket, sőt meg tudjuk
          kromatográfiás mechanizmust ma már   lesz az elválasztás alapja. Ennek az előnye,   határozni az egyes izomerek
          egyre ritkábban alkalmazzák.      hogy vízoldékony töltéssel rendelkező   koncentrációját is. Természetesen ez csak

          10   KÉMIAI PANORÁMA  28. SZÁM, 2024. ÉVFOLYAM
   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15