Page 10 - No28
P. 10
KLÍMAVÁLTOZÁS, HŐHULLÁMOKTOK
MŰSZERES
VIZSGÁLA
KÉMIAI
FORDÍTOTT FÁZISÚ molekulákat, mint peptideket és
FOLYADÉK fehérjéket is el tudunk választani az ionos
KROMATOGRÁFIA kölcsönhatásuk alapján. Ezt a fajta
Nagy forradalmat jelentett, amikor kromatográfiát preparativ célra is
megfordították az állófázis és mozgó fázis alkalmazzák, az oszlopok méretének
polaritását. Bevonták a poláris szilikagél növelésével, mivel az elválasztott fehérje
felszínét hosszú alkil láncokkal, amely molekulák megőrzik természetes aktív
lehetővé tette, hogy a mozgófázis poláris, tulajdonságaikat az elválasztás után.
magas víztartalmú folyadék legyen. Így a
fordított fázisú nagynyomású MÉRETKIZÁRÁSOS
kromatográfia létrejöttével, poláris, KROMATOGRÁFIA
vízoldékony anyagokat, aminosavakat, A biokémiai kutatásokban nagy
peptideket, oligonukleotidokat, cukrokat szerepet játszik a méretkizárásos (size-
is el lehetett választani. Ez az eljárás nagy exclusion) kromatográfia amely
segítséget nyújtott a biokémia tudomány hidrodinamikai átmérőjük vagy
robbanásszerű fejlődéséhez is. A fordított hidrodinamikai térfogatuk alapján
fázisú kromatográfiás eljárás további választja el a molekulákat (a nagyobb
előnye, hogy a retenciós idő az anyagok molekulák gyorsabban eluálódnak). Az
hidrofil-lipofil jellegétől függenek, ami a állófázis ezesetben porózus gél. Itt az
képletből könnyen számítható. elució sorrendjét kizárólag a molekula
Amennyiben vízzel keveredő szerves mérete határozza meg, az anyagok nem
oldószert is alkalmazunk, amelynek lépnek erős kölcsönhatásba az állófázissal,
koncentrációját az analízis alatt amely mintegy szűrő viselkedik. A kisebb
folyamatosan növeljük, komplex elegyek molekulák nagyobb utat tesznek meg a
szétválaszthatók, és koncentrációjuk kromatográfiás rendszerben, mert
mérhetővé válik egy analízis során. Ezt beférnek az allófázis kis pórusaiba, míg a
nevezzük gradiens elúciós nagyobb molekulák gyorsabban
kromatográfiának. Ennek segítségével áthaladnak a gél állófázis csatornáin. Ez a
narancs kivonatot, gyógyszerkeverékeket, fajta kromatográfia kiválóan alkalmas
vizelet és vérplazma mintákat lehet nagymérető biokémiai molekulák
analizálni, kis mintaelőkészítés után pár elválasztására, pl. ellenanyagok,
perc alatt. Nagy előnye a kromatográfiás antitestek, vagy akár kisebb vírusok
analízisnek, hogy nagyon kevés mintára analízisére is.
van szükség 10 mikroliter 1 mM os Az affinitás kromatográfia a biokémiai
koncentrációban, ultraibolya detektorral elegyek specifikus biológiai
aromás gyűrűt tartalmazó molekulákat kölcsönhatásán alapuló elválasztás. Ilyen
tudunk mérni. Amennyiben biológiai kölcsönhatás például az antigén
tömegspektrométert is helyezünk az UV és antitest vagy enzim és szubsztrát,
detektor után, az egyes csúcsokat mutató illetve receptor és ligandum közötti
molekulák mólsúlya is meghatározható, kapcsolat.
így a molekulák könnyen A kromatográfiás elválasztás
beazonosíthatóvá válnak. A hatékonyságára a legjobb példa a királis
tömegspektroszkópiás detektorok még kromatográfia, amely az állófázissal eltérő
érzékenyebbek, mint az UV detektorok, módon reagáló sztereoizomerek
előre megjósolni az elúció sorrendjét. így például egy billiomodnyi (ppb) elválasztására is alkalmas. Az
További hátrány, hogy a minta poláris szennyező anyagot is ki tudunk mutatni enantiomerek csak optikailag aktív
komponensei irreverzibilisen kötődhetnek gyógyszeralapanyagokban. rendszerben mutatnak különbséget,
az álló fázishoz. A nagy tisztaságú szerves Amennyiben az állófázis ioncserélő, minden más fizikai és kémiai
oldószerek drágák és mérgezőek a (pld. pozitív vagy negatív töltésű) gyanta, tulajdonságuk megegyezik és mégis el
környezet számára is. Ezért ezt a fajta ioncserélő kromatográfiás mechanizmus tudjuk választani őket, sőt meg tudjuk
kromatográfiás mechanizmust ma már lesz az elválasztás alapja. Ennek az előnye, határozni az egyes izomerek
egyre ritkábban alkalmazzák. hogy vízoldékony töltéssel rendelkező koncentrációját is. Természetesen ez csak
10 KÉMIAI PANORÁMA 28. SZÁM, 2024. ÉVFOLYAM