Page 25 - No8

IMMUNFESTÉS

Immunfehérjék akcióban közötti kommunikációban talamusz alatt, az agy alapjánál helyezkedik
vehetnek részt. A
el. Ennek a területnek az egyik funkciója,
hogy irányítja a hipofízisben zajló prolaktin
neuropeptidekre az jellem-
ző, hogy nem minden sejtre
hatnak, hanem csak megha- felszabadulást. A prolaktin nevű hormon a
vérbe jutva a tejtermelés beindítását és fenn-
tározott idegrendszeri funk- tartását szolgálja. A TIP39 receptora ellen
ciókban vesznek részt. Az termelt antitestek segítségével azt is sikerült
elmúlt években több immunfestéssel kimutatni, hogy az endokrín
neuropeptidet is azonosítottak, hipotalamuszban levő sejtek tartalmazzák a
az egyik az úgynevezett TIP39 receptorát, vagyis az ide a talamuszból
tuberoinfundibuláris peptid 39 érkező idegrostokból ingerület hatására fel-
(TIP39) volt. Ennek a fehérjének létezik szabaduló TIP39 ezen receptorokon keresztül
specifikus, csak őt felismerni képes recepto- képes befolyásolni a prolaktin felszabadulást,
infor
ra, azaz gyanítható volt, hogy az agyi infor- - így a tejtermelést. További
máció-átvitelben részt vesz, de a funkciója immunhisztokémiai vizsgálatok arra is fényt
TIP39 sejtek elhelyezkedése patkány anya egyáltalán nem ismertük. Első lépésként derítettek, hogy a talamuszban levő TIP39
agyában a talamusz ún. posterior tehát meg kellett vizsgálni immunfestés tartalmú idegsejtek a gerincvelőnek abból a
intralamináris magjában (PIL). Környező segítségével, hogy hol van TIP39 az agyban. részéből kapnak beidegzést, melyek szoptatás

3
db,
5000
ént
kb.
sejtet

egyenk
tartal
agyi struktúrák: MGB (medial geniculate Csak 3 db, egyenként kb. 5000 sejtet tartal-- hatására aktiválódnak. Létezik egy fehérje, a
body), és SN (substantia nigra) mazó sejtcsoportban volt jelen a TIP39, azaz Fos fehérje, ami nyugalomban levő neuro-
a TIP39-et kódoló gén csak ezekben a sejtek- nokban nincsen jelen, de aktiváció hatására
a vizes közegben kicsapódik, mégpedig olyan ben aktiválódik a több 10 milliárd idegsejt megjelenik, és jelenléte immunhisztokémiai
gyorsan, hogy nincs ideje szétdiffundálni. Ez közül. Az immunfestés ráadásul azt is meg- módszerekkel kimutatható. Ezen fehérje
a reakció a szöveten elszíneződést okoz mutatta, hogy az egyik sejtcsoport hím álla- immunhisztokémiai vizsgálata révén sikerült
éppen ott, ahol a vizsgált fehérjénk előfordul. tokban nem tartalmazta a TIP39-et, ez csak azt is bizonyítani, hogy a talamuszban levő
A leggyakrabban alkalmazott enzim a torma- nőstényekben, azon belül is csak anyaálla- TIP39-et tartalmazó sejtek Fos fehérjét kez-
növényből származó peroxidáz enzim. Ez tokban fordult elő. denek kifejezni, vagyis aktiválódnak anyaál-
többféle reakciót is katalizálhat, de legáltalá- Ebből következtetni lehetett rá, hogy ezek latokban szoptatás hatására. További funkci-
nosabban használt a a sejtek olyan funkcióban vesznek részt, ami onális vizsgálatok is megerősítették a TIP39
3,4,3´,4´-tetraaminobifenil-hidroklorid, az anyákra jellemző. Ez a sejtcsoport az agy szerepét a szoptatás hatására meginduló tej-
másnéven 3,3´-diaminobenzidin (DAB) kon- talamusz nevű részén helyezkedett el, ami az elválasztás szabályozásában. Mindezeket a
verziója, mely a mellékelt reakciónak megfe- érzékszervekből származó ingerületeket vizsgálatokat nem lehetett volna elvégezni az
lelően alakul át vízben és szerves oldószerek- továbbítja a magasabb területek felé. Szintén immunfestés által nyújtott információk nél-
ben egyaránt oldhatatlan barna színű poli- immunfestés segítségével sikerült kimutatni, kül, melyek mint láthatjuk, bizonyos fehérjék
merré. hogy a TIP39 nemcsak a sejttestekben van elhelyezkedésének meghatározása révén fon-
jelen, hanem idegrostokban is. tos információkat adnak nem csak az adott
A szoptatás neuroanatómiája Idegrostokban neuropeptidek sosem szinteti- fehérje területi eloszlásáról, de funkciójáról
A következőben az immunfestés rengeteg zálódnak, oda mindig a sejttestekből kerül- is.
biológiai felhasználása közül egy példa nek transzportfolyamatok segítségével. Az immunfestést általános jellege és az
bemutatásával illusztrálom annak hasznossá- Immunhisztokémiai eljárásokkal láthatóvá általa nyújtott információ hasznossága az
gát. Ismert, hogy a DNS-en kódolt 3-50 ami- váltak TIP39 tartalmú idegrostok anyaállatok egyik leggyakoribb kutatási technikává tette.
nosavból álló neuropeptidek az agysejtek endokrín hipotalamikus agyterületén, ami a A fent említett módszeren kívül számos vari-
ációja ismeretes, melyek tovább szélesítik az
alkalmazások körét. Így bár alternatív techni-
kák jelentek meg az utóbbi időben a fehérjék
jelenlétének szövetben való kimutatására, az
immunfestés továbbra is őrzi jelentőségét a
biológiai-biokémiai tudományokban, vala-
mint az orvostudományban, a szövettani
diagnosztikában. Dobolyi Árpád
Semmelweis Egyetem,
Peroxidáz enzim jelenlétében a DAB polimerizálódik és vizes oldatból kicsapódik Neuromorfológiai Laboratórium
Antitestek előállítása és felhasználása
KÉMIAI PANORÁMA 8. SZÁM, 2012. ÉVFOLYAM 1. SZÁM 25